PGC1 alpha (PPARGC1A)靶点介绍及实验小贴士

   PGC1 alpha（过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活剂1-alpha）是类固醇受体和核受体的转录共激活剂。

   PGC1 alpha增加解偶联蛋白启动子上PPARG和甲状腺激素受体的转录活性。

   PGC1 alpha可以调节有助于适应性产热过程的关键线粒体基因。

   PGC1 alpha通过协调参与葡萄糖和脂肪酸代谢的多种基因的表达，在响应膳食供应的代谢重编程中发挥重要作用。它的表达水平受长期能量供应的控制，在高脂饮食或肥胖环境下表达水平下降。

   PGC1 alpha以ESRRA依赖性方式诱导骨骼肌中 PERM1 的表达。

   PGC1 alpha参与昼夜节律和能量代谢的整合。通过激活RORA 和RORC以及代谢基因（如PDK4和PEPCK），调控生物钟基因（如ARNTL/BMAL1和NR1D1）的振荡表达。

   PGC1 alpha长期以来被认为是治疗II型糖尿病、肥胖症、心肌病或其他代谢紊乱的潜在治疗靶点。

   PGC1 alpha 的表达在不同组织间差异很大。它在适应性产热和能量代谢过程相关组织中高度表达。

   PGC1 alpha在棕色脂肪分化早期被诱导，与白色脂肪细胞相比，它优先在成熟的棕色脂肪细胞中表达。

   PGC1 alpha在人中有 9 种异构体，在小鼠中有 4种异构体。

   在心脏、骨骼肌、肝脏和肾脏中高表达。

   在大脑和胰腺中以较低水平表达。

   在肠道和白色脂肪组织中的表达水平非常低。

   PGC1 alpha的定位依赖于其乙酰化状态，可以定位于细胞质和细胞核中。在氧化应激(如活性氧)条件下变得更倾向定位于细胞核。

   人(Q9UBK2): 异构体 1 / B4 / B5: 90-92 kDa (预测)                         异构体 9: 77 kDa (预测)                         异构体 NT-7a / B4-8a / B5-NT / 8a: 30-33kDa (预测)                         异构体 B4-3ext: 15 kDa (预测)

   小鼠 (O70343): 异构体 1: 91 kDa (预测)                                异构体 2-3: 41-42 kDa (预测)                             异构体 4: 30 kDa (预测)

   大鼠 (Q9QYK2): 91 kDa (预测)

   PGC1 alpha存在乙酰化、磷酸化和泛素化修饰

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   PGC1 alpha多存在于细胞核中，所以在WB实验中使用核裂解液有助于获得理想实验结果。

   PGC1 alpha只高表达于特定的组织细胞中，有些样本可能会出现弱表达或无表达的情况。请选择合适的实验样本，推荐使用阳性对照，以确认实验体系没有问题。

   由于PGC1 alpha存在多种异构体，分子量差异较大（预测分子量15-92 kDa）。所以在WB实验中可能会出现多条条带，或实际检测到的条带大小与预测值不同。通常预测分子量77kDa的异构体只能在肝脏细胞中检测的到；预测分子量90 kDa的PGC1 alpha异构体可能在心脏、骨骼肌、肝脏和肾脏表达。有些样本可能检测到预测分子量为30 kDa的PGC1 alpha异构体。

   建议使用新鲜制备的裂解液，尽量避免蛋白降解引起杂带现象。

   小鼠棕色脂肪组织、骨骼肌组织裂解液

   人心脏组织裂解液

   大鼠肾脏组织裂解液

   分化的3T3-L1细胞和HepG2细胞裂解液

   小鼠白色脂肪组织裂解液

     在实验中除了需要注意常规问题外，还要特别关注以下关键控制点：

  样本制备

     添加足够量的蛋白酶抑制剂以避免靶标蛋白降解。

     超声破碎样本以富集更多的PGC1 alpha靶标蛋白。

     不要裁膜，保留全膜进行实验。

     通过Bradford分析、Lowry分析或BCA分析测定样本总蛋白浓度。

   转膜

     强烈建议转膜完成后使用丽春红染色，确定转膜是否成功。